返回
專題      專題
返回

目錄

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型


非酒精性脂肪肝病模型飼料和復制模型方法

非酒精性脂肪肝病模型是當前研究的熱點之一,同一種動物有多種模型飼料可以選擇,不同動物之間差別也很大。請根據擬準備使用的動物,從左邊導航中點擊瀏覽相關內容、選擇模型飼料。

 

 

文獻綜述
www.ytdsyjtsc.com
2012年7月1日出版

非酒精性脂肪肝病(炎)模型與飼料

(Model of nonalcoholic fatty liver disease,NASH,and model diet )
南通特洛菲飼料科技有限公司技術部 綜述

【摘要】本文介紹了非酒精性脂肪肝病的概念、非酒精性脂肪肝炎模型的的復制方法,與非酒精性脂肪肝的鑒別方法,介紹了當前使用的不同模型飼料的使用效果。

【關鍵詞】非酒精性脂肪肝病;非酒精性脂肪肝炎模型;模型飼料;實驗動物

脂肪沉積在肝臟,稱為脂肪性肝。由飲酒(酒精)所致的脂肪肝稱為酒精性脂肪肝(點擊查看酒精性脂肪肝模型與飼料),而酒精之外的因素所致的脂肪肝稱為非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)。非酒精性脂肪肝病又分為兩種,一種是非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver,NAFL),肝臟中只有脂肪沉積,沒有炎癥。另一種是非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH),肝臟中除了有脂肪沉積,而且有慢性炎癥,這種炎癥可以發展,出現炎性壞死、凋亡,肝功能不正常,繼續發展則出現肝硬化甚至肝癌。

因此,如果要復制非酒精性脂肪肝病模型,那么,就要看是復制非酒精性脂肪肝(NAFL)模型,還是非酒精性脂肪肝炎(NASH)模型。

一、怎樣判斷是NAFL模型還是NASH模型

從上面的介紹已經知道,NAFL和NASH的最大區別在于肝臟內是否有慢性炎癥表現,無則NAFL,有則NASH,如果還發展為炎性壞死、凋亡、肝功能不正常,那也一定是NASH。因此,在復制模型時,必需提供形態學和生化兩方面的檢測結果來說明建立的模型是NAFL模型還是NASH模型。正因為如此,凡是研究非酒精性脂肪肝病的論文,一般都提供以下方面的指標變化情況:在形態學方面,組織切片染色觀察是否有脂肪沉積、炎癥、炎性細胞浸潤、壞死、線粒體損傷、原膠原染色觀察,等等,生化方面,肝臟總脂、血漿游離脂肪酸、血糖、血漿胰島素、血漿甘油三酯、丙氨酸轉氨酶(ALT)、氧化應激、脂質過氧化等等是否有改變。

二、非酒精性肝炎模型(NASH)的建立方法

1. 高脂液體飼料作為NASH模型飼料

喂飼方法不同,效果不同,原理不同。

方法一:普通喂養法。

模型飼料:上面列表中列出的高脂飼料。

模型效果:大鼠喂養3周時,模型飼料組和對照飼料組體重和熱量攝入沒有差別。但是,形態學看到,對照飼料組和模型飼料組肝臟都有脂肪沉著、炎癥、炎癥細胞浸潤,但對照飼料組肝臟中很輕。生化測定觀察到,模型飼料組肝臟總脂濃度較高(對照組的2倍左右),肝臟TNF-α含量較高(對照組的2倍左右),應激反應明顯,原膠原mRNA(procollagen mRNA)表達增強,血漿胰島素水平升高。

模型評價:模型組熱量攝入與對照組相同。肝臟病變比較輕,丙氨酸轉氨酶(ALT)沒有變化。

方法二:胃管給飼料:強制喂飼法

模型飼料和對照飼料:高脂液體飼料。對照飼料給正常熱量的液體飼料。采取胃管給飼料,迫使模型組高熱量攝入。埋管方法是,在麻醉下,剖腹暴露胃,向其中插入一根管子,管子的另一端從皮下到達頸部背側穿出,把管端縫在頸部肌肉上固定,縫合皮膚。手術后第7天開始,每天經此管注入液體飼料,自由飲水。

胃內埋管方法非常簡單,不像想象中的那樣難,關鍵是其中的技巧,請點擊閱讀“胃內埋管方法

模型效果:

在大鼠,模型組21天時可見肥胖,高血糖,瘦素升高,血漿胰島素、甘油三酯升高,但肝臟尚沒有脂肪變性,然后繼續演變成肝臟脂肪沉積,小葉炎癥,壞死、凋亡,氧化應激明顯,65天時能看到肝臟纖維化的表現(膠原纖維增多),類似于臨床NASH3期表現。

在C57BL/6小鼠,給飼料9周時,觀察到肥胖,胰島素抵抗,然后出現肝臟增生,脂肪沉積,炎癥,壞死和纖維化。但是,肝臟某些生化指標的改變不能模擬人體的NASH。

模型評價:由于NASH往往是肥胖的并發癥,而該模型保障了每天高熱量攝入,表現肥胖。該方法在大鼠中模型幾乎能夠模擬出人的NASH的所有異常表現。這個模型中需要使用胃管,手術方法并不復雜,動物死亡率不高。缺點是,胃管給飼料不僅不符合動物自然的飲食方法,也不符合人類的飲食習慣。

注意:有人在20天年齡的Wistar大鼠中采用高脂飼料喂養,喂養方法采用自由飲食,結果是14周也沒有看到NASH情況。由此也可以推測上面這個方法中通過胃管強制性給飼料很關鍵。

2. 純化型高脂高糖顆粒飼料作為NASH模型飼料

模型效果:喂養大鼠24周內肝臟脂肪沉積,血清丙氨酸轉氨酶(ALT)增加。

模型評價:隨喂養時間的延長,脂肪沉積程度不改變,肝功能變化在體重增加前發生。

3. 高脂飼料添加丙基硫氧嘧啶作為NASH模型飼料

模型效果:喂養SD大鼠,4周有胰島素抵抗,6周后肝臟脂肪沉積、炎癥。

模型評價:該法的關鍵是了丙基硫氧嘧啶(抗甲狀腺藥)的輔助。對此模型有興趣的讀者,可以點擊查看關于丙基硫氧嘧啶(propylthiouracil)作為NASH模型輔助措施的參考文獻

4. 高脂飼料添加金硫葡萄糖作為NASH模型飼料

該方法中用金硫葡萄糖(GTG,gold thioglucose)輔助。如果對這種方法感興趣,點擊查看(關于金硫葡萄糖(gold thioglucose)作為NASH模型輔助措施的參考文獻)。

模型效果:喂養C57BL/6小鼠12周,可見中心型肥胖,胰島素抵抗,肝臟脂肪沉積,炎癥,纖維化。

5. 高脂高膽固醇飼料作為NASH模型飼料

模型飼料:高脂高膽固醇飼料。

模型效果:喂養大鼠4周時,肝臟實質脂肪沉積,然后逐漸加重,在12-48周,NSAH發生和肝功能異常,16周時少數大鼠肝臟纖維化,24周時所有大鼠肝臟纖維化,在36-48周期間肝臟纖維化已經到了嚴重的程度。

在雞中觀察到,血漿高膽固醇、高甘油三酯,肝臟脂肪沉積、炎癥。在幼年兔中看到肥胖,肝重增大,肝臟脂肪沉積,纖維化。

6. 高脂、高蛋白、膽堿缺乏飼料作為NASH模型飼料

模型效果:喂養豬24周時,嚴重的代謝綜合癥,肝臟大小血管脂肪沉積,血清脂聯素(adiponectin)降低、瘦素(leptin)升高、腫瘤壞死因子TNF)升高,肝臟甘油三酯升高,肝臟過氧化應激增強。

7. 高脂、MCD飼料作為模型飼料

MCD的意思是蛋氨酸和膽堿均缺乏。

模型效果:喂養C57BL/6小鼠23周看到肥胖,高血脂,胰島素抵抗,肝臟脂肪沉積,炎癥,纖維化,肝臟甘油三酯含量增加,血清ALT升高。

8. 純化型高脂高糖MCD飼料作為NASH模型飼料

優點:造模簡單,所需時間短。多種動物均可采用。

模型效果:

在鼠中觀察到3天發生肝臟炎癥,1-2周發生脂肪沉積,2周時可見炎性壞死,然后發展成纖維增生,3周時氧化應激明顯,不發生胰島素抵抗,體重減輕(肌肉和脂肪均減少)。

9. 高脂飼料聯合靜脈注射oxLDL

原理:NASH病人血漿氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oxLDL)濃度比正常人高,而oxLDL對脂肪代謝有損傷性作用。該模型巧妙地利用這一點,在喂養純化型高脂飼料的同時,每3天靜脈注射oxLDL一次。

模型效果:喂養C57BL/6J小鼠23周看到肥胖,肝臟脂肪沉積,輕度纖維化,脂質過氧化。在21-23周期間給予oxLDL不僅加劇肝臟脂肪變性,纖維化和脂質過氧化,而且炎癥加劇,包括肝臟損傷和炎性細胞浸潤更明顯。

三、復制非酒精性肝炎模型的注意點

除了前面說過的要注意從形態學和生化檢測來進行模型評估外,還需要注意以下幾點:

1. 有沒有肥胖

在NASH病人當中,無肥胖的30%左右,肥胖的占70%左右,如果研究的目的與肥胖無關,那么,模型不應該出現肥胖或者不是繼發于肥胖的,相反,如果研究的是肥胖伴有NASH,那么,肥胖就成為必需。

2. NASH的研究是當前研究的熱點,但公認的模型尚未出現

目前,不同研究從不同的角度,使用不同的方法,來開展NASH的研究。上面介紹了很多方法,但公認的方法尚沒有誕生,很多還沒有得到他人的重復。因此,研究者選擇模型方法時,應當謹慎,可能需要自己來重復觀察,最好做預試驗,防止在正式實驗后發現不滿意的結果。

3. 關于NASH的發展的研究

在NASH病人當中,有些可以發展成肝硬化,甚至肝癌。在動物NASH模型中,理論上試驗時間越長,越有可能也這樣發展。但實際上,還沒有這方面的報道。目前,NASH模型中只是發展到肝臟纖維增生,尚沒有到達肝硬化的程度。

3. 關于NASH模型中動物品種、性別的差別

不同的品種和性別對于NASH模型的建立可能有差別的,建議查看關于動物品種和性別差異的參考文獻進行閱讀。雄性大鼠比雌性的脂肪肝更明顯,肝脂更多、血清ALT更高。Wistar大鼠不論是雌雄,都要比SD大鼠有肝脂更多、血清ALT更高、肝臟與體重的比率更大。Wistar雌性大鼠比雌性SD更肥。雖然所有大鼠都發展成脂肪肝,但是炎性壞死和炎癥都很輕,纖維化可能看不到。與Wistar大鼠比較,C57/BL6小鼠炎癥很明顯,脂質過氧化和線粒體損傷更明顯,而脂肪肝比較輕,肝甘油三酯要低,脂質過氧化也較輕。




有困惑?那就商量唄!

重要資料

高脂飲食或模型復制的研究者請注意:

一篇SCI論文總結了高影響因子(IF)期刊發表的論文所用的高脂模型飼料情況,提供了驚人的數據:
對照組飼料類型設計合理只有14%,其余86%的研究論文中都有問題!敬請讀者:點擊閱讀

?高脂肪脂模型飼料的對照飼料合理選擇和注意點”

國際不同的著名企業高脂飼料的對比:壞毛病和糾正

各著名企業西方飲食造模飼料代碼對照表

小幫手
關閉
收藏本網站
丝瓜苹果下载ios二维码_丝瓜app官网版ios下载_丝瓜app向日葵app幸福宝