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當前專題

輔助降血脂功能評價方法(動物實驗部分)
Method for the Assessment of Assisting Blood
Lipids Reduction Function

南通特洛菲飼料科技有限公司產品介紹
輔助降血脂功能評價方法專用模型飼料


飼料類型:日糧型飼料。

混合型高酯血癥大鼠模型飼料:大鼠,按FDA規定的配方要求,本公司產品代碼:TP0800。

混合型高酯血癥大鼠對照飼料:標準飼料作為基礎飼料,產品代碼:LAD2001。

高膽固醇血癥大鼠模型飼料:大鼠,按FDA規定的配方要求,本公司產品代碼:TP0801。

高膽固醇血癥大鼠對照飼料:標準飼料作為基礎飼料,產品代碼:LAD2001。

高膽固醇血癥金黃地鼠模型飼料:金黃地鼠,按FDA規定的配方要求,本公司產品代碼:TP0802。

對照飼料:標準飼料作為基礎飼料,產品代碼:LAD2004。

飼料外形:顆粒狀(棒狀)。


注1:本產品為輔助降血脂功能評價方法中的專用模型飼料,屬于動物實驗檢驗范疇,不建議作為科研用高血脂或高膽固醇血癥模型飼料。

注2:模型飼料為高脂肪飼料,應當短期內使用,不應當長期保存。建議使用前購買。

以上產品已經在多家鑒定單位使用,效果滿意。



2012年4月23日國家食品藥品監督管理局(FDA)頒發了最新“保健功能評價方法”。這里是根據“輔助降血脂功能評價方法”中的動物實驗部分的內容進行了整理。

根據血脂異常的類型,輔助降血脂功能按照不同的血脂類型設立分類的動物試驗。

一、動物實驗試驗項目


根據受試樣品的作用機制,分成三種情況。

1. 輔助降低血脂功能:降低血清總膽固醇和血清甘油三酯

2. 輔助降低血清膽固醇功能:單純降低血清膽固醇

3. 輔助降低血清甘油三酯功能:單純降低血清甘油三酯

觀察指標

1. 體重

2. 血清總膽固醇

3. 血清甘油三酯

4. 血清高密度脂蛋白膽固醇

5 血清低密度脂蛋白膽固醇

二、試驗原則


1. 動物實驗和人體試食試驗所列指標均為必測項目。

2. 根據受試樣品的作用機制,可在動物實驗的兩個動物模型中任選一項。

三、結果判定


1.混合型高脂血癥動物模型

輔助降低血脂功能結果判定:模型對照組和空白對照組比較,血清甘油三酯升高,血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高,差異均有顯著性,判定模型成立。

(1)各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,且任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動物實驗結果陽性。

(2)各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對照組,各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低血清膽固醇功能動物實驗結果陽性。

(3)各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對照組,血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低血清甘油三酯功能動物實驗結果陽性。

2. 高膽固醇血癥動物模型

模型對照組和空白對照組比較,血清總膽固醇(TC)或低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高,血清甘油三酯(TG)差異無顯著性,判定模型成立。各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,差異有顯著性,并且各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)不顯著低于模型對照組,血清甘油三酯不顯著高于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低血清膽固醇功能動物實驗結果陽性。

四、動物實驗檢驗方法


根據血脂異常的類型,輔助降低血脂功能按照受試物作用機制的不同,設立分類的動物試驗。

動物試驗:分成二種情況:混合型高酯血癥動物模型/高膽固醇血癥動物模型

(一)混合型高酯血癥動物模型

1. 原理

用含有膽固醇、蔗糖、豬油、膽酸鈉的飼料喂養動物可形成脂代謝紊亂動物模型,再給予動物受試樣品,可檢測受試樣品對高脂血癥的影響,并可判定受試樣品對脂質的吸收、脂蛋白的形成、脂質的降解或排泄產生的影響。

2. 儀器及試劑

解剖器械、分光光度計,自動生化分析儀,膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒。

3. 動物選擇及飼料

混合型高脂血癥動物模型飼料
南通特洛菲飼料科技有限公司提供的符合我國FDA最新規定的“輔助降血脂功能評價方法”中“混合型高脂血癥動物模型”飼料的產品代碼是:TP0800
該產品已經在多家鑒定單位使用,效果滿意。

健康成年雄性大鼠,適應期結束時,體重200±20g,首選SD大鼠,每組8-12只。

模型飼料:在維持飼料中添加20.0%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉,適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外,模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣:磷均要達到維持飼料的國家標準。

4.劑量分組及受試樣品給予時間:

實驗設三個劑量組、空白對照組和模型對照組,以人體推薦量的5倍為其中的一個劑量組,另設二個劑量組,必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間為30天,必要時可延長至45 天。

5.實驗步驟:

(1)適應期:

于屏障系統下大鼠喂飼維持飼料觀察5-7天。

(2)造模期:

按體重隨機分成2組,10只大鼠給予維持飼料作為空白對照組,40只給予模型飼料作為模型對照組。每周稱量體重1次。

模型對照組給予模型飼料1-2周后,空白對照組和模型對照組大鼠不禁食采血(眼內眥或尾部),采血后盡快分離血清,測定血清TC、TG、LDL-C 、HDL-C水平。根據TC水平將模型對照組隨機分成4組,分組后空白對照組和模型對照組比較TC、TG、LDL-C 、HDL-C差異均無顯著性。

(3)受試樣品給予:

分組后,三個劑量組每天經-口給予受試樣品,空白對照組和模型對照組同時給予同體積的相應溶劑,空白對照組繼續給予維持飼料,模型對照組及三個劑量組繼續給予模型飼料,并定期稱量體重,于實驗結束時不禁食采血,采血后盡快分離血清,測定血清TC、TG、LDL-C 、HDL-C水平。

(4)觀察指標:TC、TG、LDL-C 、HDL-C。

(5)數據處理和結果判定

一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F 值, 36F 值 < F0.05,結論:各組均數間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計;對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換,待滿足正態或方差齊要求后,用轉換后的數據進行統計;若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的,改用秩和檢驗進行統計。

(6)動物實驗結果判定:

輔助降低血脂功能結果判定:模型對照組和空白對照組比較,血清甘油三酯升高,血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高,差異均有顯著性,判定模型成立。

——各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,且任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低血脂功能動物實驗結果陽性。

——各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清甘油三酯不顯著高于模型對照組,各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低膽固醇功能動物實驗結果陽性。

——各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清甘油三酯降低,差異均有顯著性,同時各劑量組血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇不顯著高于模型對照組,血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低甘油三酯功能動物實驗結果陽性。

注意事項

(1)在建立動物模型中,可因動物品系、飼養管理而影響模型的建立。

(2)保證維持飼料的各種營養成分,必要時需進行檢測,除了粗脂肪外,模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣:磷均要達到維持飼料的國家標準。

(3)模型飼料喂養期間,模型組血中膽固醇水平比較穩定,甘油三酯水平會逐漸恢復正常水平,故模型飼料給予時間不能超過8周。

(二)高膽固醇血癥動物模型

1. 原理

用含有膽固醇、豬油、膽酸鈉的飼料喂養動物可形成高膽固醇脂代謝紊亂動物模型,再給予動物受試樣品,可檢測受試樣品對高膽固醇脂血癥的影響,并可判定受試樣品對脂質的吸收、脂蛋白的形成、脂質的降解或排泄產生的影響。

2. 儀器及試劑

解剖器械、分光光度計,自動生化分析儀,膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒。

高膽固醇血癥動物模型飼料
南通特洛菲飼料科技有限公司提供的符合我國FDA最新規定的“輔助降血脂功能評價方法”中“高膽固醇血癥動物模型”飼料的產品代碼分別是:
大鼠用:TP0801
金黃色地鼠用:TP0802
該產品已經在多家鑒定單位使用,效果滿意。

3. 動物選擇及飼料

大鼠模型:健康成年雄性大鼠,適應期結束時,體重200±20g,首選SD 種大鼠,每組8-12只。

金黃地鼠模型:健康成年雄性金黃地鼠,適應期結束時,體重100±10g,每組8-12只。

模型飼料

大鼠模型:在維持飼料中添加1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉、3-5%豬油,適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外,模型飼料的其它質量指標均要達到維持飼料的國家標準。

金黃地鼠模型:在維持飼料中添加0.2%膽固醇,其余同大鼠模型。

4.劑量分組及受試樣品給予時間:

實驗設三個劑量組、空白對照組和模型對照組,以人體推薦量的5倍為其中的一個劑量組,另設二個劑量組,必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間為30天,必要時可延長至45天。

5.實驗步驟:

(1)適應期:

于屏障系統下動物喂飼維持飼料觀察5-7天。

(2)造模期:

按體重隨機分成2組,10只動物給予維持飼料作為空白對照組,40只給予模型飼料作為模型對照組。每周稱量體重1次。

模型對照組給予模型飼料1-2周后,空白對照組和模型對照組動物不禁食采血(眼內眥或尾部),采血后盡快分離血清,測定血清TC、TG、LDL-C 、HDL-C水平。根據TC水平將模型對照組隨機分成4組,分組后空白對照組和模型對照組比較TC、TG、LDL-C 、HDL-C差異均無顯著性(P>0.05)

(3)受試樣品給予:

分組后,三個劑量組每天經口給予受試樣品,空白對照組和模型對照組同時給予同體積的相應溶劑,空白對照組繼續給予維持飼料,模型對照組及三個劑量組繼續給予模型飼料,并定期稱量體重,于實驗結束時不禁食采血,采血后盡快分離血清,測定血清TC、TG、LDL-C 、HDL-C水平。

(4)觀察指標:TC、TG、LDL-C 、HDL-C。

(5)數據處理和結果判定:

一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F 值,36F 值 < F0.05,結論:各組均數間差異無顯著性;F 值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計;對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換,待滿足正態或方差齊要求后,用轉換后的數據進行統計;若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的,改用秩和檢驗進行統計。

(6)動物實驗結果判定:

輔助降低膽固醇功能結果判定:模型對照組和空白對照組比較,血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇升高,差異有顯著性,血清甘油三酯差異無顯著性,判定模型成立。各劑量組與模型對照組比較,任一劑量組血清總膽固醇或低密度脂蛋白膽固醇降低,差異有顯著性,并且各劑量組血清高密度脂蛋白膽固醇不顯著低于模型對照組,血清甘油三酯不顯著高于模型對照組,可判定該受試樣品輔助降低膽固醇功能動物實驗結果陽性。

注意事項

(1)在建立動物模型中,可因動物品系、飼養管理而影響模型的建立。

(2)保證維持飼料的各種營養成分,必要時需進行檢測。


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說     明


輔助降血脂功能評價方法中使用的模型飼料是專門為鑒定或評估輔助降血脂功能功能食品的專用飼料,具有強制性要求或規定,既要保障質量,又要符合規定的要求。
作為鑒定或評估專用,如果用作科研中復制高脂血癥模型并不很理想。

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