返回
當前專題

輔助降血糖功能評價方法(動物實驗部分)
Method for the Assessment of Assisting Blood
Sugar Reduction Function

南通特洛菲飼料科技有限公司產品介紹
輔助降血糖功能評價方法專用模型飼料


飼料類型:日糧型飼料。

輔助降血糖功能評價專用模型飼料:高熱能飼料,按照中國FDA規定,產品代碼:TP0850。

輔助降血糖功能評價對照飼料:標準飼料作為基礎飼料,產品代碼:LAD2001。

飼料外形:顆粒狀(棒狀)。


注1:本產品為輔助降血糖功能評價方法中的專用模型飼料,屬于動物實驗檢驗范疇,不建議作為科研用高血糖模型飼料。

注2:本產品已經按照規定的要求進行了配比,無需按照規定中所陳述的混合方法制作,既減輕了用戶的負擔,又避免了用戶在混合過程中可能導致的營養素損失。如果用戶希望自行混合,則請提前說明。

以上產品已經在多家鑒定單位使用,效果滿意。


2012年4月23日國家食品藥品監督管理局頒發了最新“保健功能評價方法”。這里是根據“輔助降血糖功能評價方法”中的動物實驗部分的內容進行了整理。

一、動物實驗試驗項目


分為方案一(胰島損傷高血糖模型)和方案二(胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型)兩種。

方案一(胰島損傷高血糖模型):體重、空腹血糖、糖耐量。

方案二(胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型):體重、空腹血糖、糖耐量、胰島素、總膽固醇、甘油三酯

二、試驗原則


1. 動物實驗和人體試食試驗所列指標均為必測項目。

2. 根據受試樣品作用原理不同,方案一和方案二動物模型任選其一進行動物實驗。

3 除對高血糖模型動物進行所列指標的檢測外,應進行受試樣品對正常動物空腹血糖影響的觀察。

三、結果判定


方案一:空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性,且對正常動物空腹血糖無影響,即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。

方案二:空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性,血脂(總膽固醇、甘油三酯)無明顯升高,且對正常動物空腹血糖無影響,即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。

四、數據處理


一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗,方差齊,計算F值,F值< F0.05,結論:各組均數間差異無顯著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計;對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換,待滿足正態或方差齊要求后,用轉換后的數據進行統計;若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的,改用秩和檢驗進行統計。

五、動物實驗與結果判定


(一)實驗準備

1.實驗動物:選用成年動物,選用小鼠(26+-2g)或大鼠(180+-20g),單一性別,大鼠每組8-12只、小鼠每組10-15只。

2.材料

(1)試劑

四氧嘧啶(C4H2N2O4?H2O,分子量160.08)或鏈脲佐菌素、地塞米松磷酸鈉注射液、葡萄糖或醫用淀粉、血糖測定試紙或試劑盒,胰島素、甘油三酯、總膽固醇測定試劑盒。

高熱能飼料
南通特洛菲飼料科技有限公司提供的符合我國FDA最新規定的“輔助降血糖功能評價方法”中動物實驗部分用“高熱能飼料”飼料的產品代碼是:TP0850
該產品已經在多家鑒定單位使用,效果滿意。

(2)高熱能飼料

豬油10% 、蔗糖15% 、蛋黃粉15% 、酪蛋白5% 、膽固醇1.2% 、膽酸鈉0.2% 、碳酸氫鈣0.6%、石粉0.4%、鼠維持料52.6%。

(3)儀器

血糖儀、全自動生化儀、可見光分光光度計、酶標儀、天平。

(二)劑量分組及受試樣品給予時間

實驗設三個劑量組和一個模型對照組,以人體推薦量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)為其中的一個劑量組,另設二個劑量組,高劑量一般不超過30倍,必要時設空白對照組。同時設給予受試樣品高劑量的正常動物組。受試樣品給予時間30天,必要時可延長至45天。

(三)實驗方法:

1. 正常動物降糖實驗:

選健康成年動物按禁食3-5小時的血糖水平分組,隨機選1個對照組和1個劑量組。對照組給予溶劑,劑量組給予高劑量濃度受試樣品,連續30天,測空腹血糖值(禁食同實驗前),比較兩組動物血糖值。

指標判定:

血糖指標:空腹血糖受試樣品劑量組與對照組比較無統計學意義,判定對正常動物血糖無影響。

2. 高血糖模型降糖實驗:

   方案一:胰島損傷高血糖模型

【原理】

四氧嘧啶(或鏈脲佐菌素)是一種細胞毒劑,可選擇性地損傷多種動物的胰島 細胞,造成胰島素分泌低下,引起實驗性糖尿病。

【造模方法】

購入成年動物,適應1天后,隨機取15只動物禁食3-5小時,測空腹血糖,作為該批次動物基礎血糖值。隨后動物禁食24小時(自由飲水),注射四氧嘧啶(用前新鮮配制)造模,小鼠45-50mg/kg BW.iv或125-130mg/kg BW.ip,大鼠50-80mg/kg BW.iv或120-160mg/kg BW.ip。5-7天后動物禁食3-5小時,測血糖,血糖值10-25mmol/L為高血糖模型成功動物。

【高血糖模型動物降糖實驗】

選高血糖模型動物按禁食3-5小時的血糖水平分組,隨機選1個模型對照組和3個劑量組(組間差不大于1.1mmol/L)。劑量組給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予溶劑,連續30天,測空腹血糖值(禁食同實驗前),比較各組動物血糖值及血糖下降百分率。

血糖下降率%= (實驗前血糖值-實驗后血糖值)/實驗前血糖值×100%

【高血糖模型動物糖耐量實驗】

劑量分組及受試樣品給予時間同1.4.2。各組動物禁食3-5小時,測定給葡萄糖或醫用淀粉前(即0小時)血糖值,劑量組給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予同體積溶劑,15-20分鐘后各組經口給予葡萄糖2.0g/kg BW或醫用淀粉3-5g/kg BW,測定給葡萄糖后各組0.5、2小時的血糖值或給醫用淀粉后1、2小時的血糖值,觀察模型對照組與受試樣品組給葡萄糖或醫用淀粉后各時間點(0、0.5、2小時)血糖值及血糖曲線下面積的變化。

血糖曲線下面積=【(0小時血糖+0.5小時血糖)×0.5 + (2小時血糖+0.5小時血糖)×1.5】/2

【指標判定】

空腹血糖指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有統計學意義,判定該受試樣品空腹血糖指標結果陽性。

糖耐量指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,在給葡萄糖或醫用淀粉后0.5、2小時任一時間點血糖下降(或血糖下降百分率升高)有統計學意義,或0、0.5、2小時血糖曲線下面積降低有統計學意義,判定該受試樣品糖耐量指標結果陽性。

血脂指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,血清膽固醇或甘油三酯下降有統計學意義,可判定該受試樣品降血脂指標陽性。

【結果判定】

空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性,且對正常動物空腹血糖無影響,即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。

   方案二:胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型(任選其一)

地塞米松誘導胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型

【原理】:

糖皮質激素具有拮抗胰島素生物效應的作用,可抑制靶組織對葡萄糖的攝取和利用,促進蛋白質和脂肪的分解及糖異生作用,導致糖、脂代謝紊亂,胰島素抵抗,誘發實驗性糖尿病。

【試驗方法】

購入健康雄性大鼠(150 20g),普通維持料適應飼養3-5天,禁食3-4小時,取尾血,測定空腹即給葡萄糖前(0小時)血糖值,給2.5g/kgBW葡萄糖后測定0.5、2小時血糖值,作為該批次動物基礎值。以0、0.5小時血糖水平分5個組,即1個空白對照組、1個模型對照組和3個劑量組,每組15只。空白對照組不做處理,3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予同體積溶劑,連續35天。各組給予維持料飼養,1周后模型對照組和3個劑量組更換高熱能飼料,喂飼2周后,模型對照組和3個劑量組在高熱能飼料基礎上分別給予地塞米松0.8mg/kgBW腹腔注射(0.008%地塞米松注射量1ml/100g體重),每日1次,連續10-12天。試驗結束,各組動物禁食3-4小時,檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。

【觀察指標】

空腹血糖、糖耐量

各組動物禁食3-4小時,測定空腹血糖即給葡萄糖前(0小時)血糖值,劑量組給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予同體積溶劑,空白對照組不做處理,15-20分鐘后各組經口給予葡萄糖2.5g/kg BW,測定給葡萄糖后各組0.5、2小時的血糖值,若模型對照組0.5小時血糖值≥10mmol/L,或模型對照組0.5小時、2小時任一時間點血糖升高或血糖曲線下面積升高,與空白對照組比較,差異有顯著性,判定模型糖代謝紊亂成立,在此基礎上,觀察模型對照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后(0.5、2小時)血糖及0、0.5、2小時血糖曲線下面積的變化。

血糖下降率%= (實驗前血糖值-實驗后血糖值)/實驗前血糖值×100%

血糖曲線下面積=【(0小時血糖+0.5小時血糖)×0.5 +(2小時血糖+0.5小時血糖)×1.5】/2

膽固醇、甘油三脂

各組動物禁食3-4小時,檢測血清膽固醇、甘油三脂,若模型對照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高,與空白對照組比較,差異有顯著性,判定模型脂代謝紊亂成立,在此基礎上,觀察模型對照組與受試樣品組血脂變化。

胰島素

各組動物禁食3-4小時,檢測血清胰島素,模型對照組與空白對照組比較胰島素抵抗指數無明顯下降,且動物糖/脂代謝紊亂成立,判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。

胰島素抵抗指數 = 胰島素/22.5e-㏑血糖 ≈ 血糖×胰島素/22.5

四氧嘧啶誘導胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型

【原理】

高熱能飼料喂飼基礎上,輔以小劑量四氧嘧啶(C4H2N2O4?H2O,分子量160.08),造成糖/脂代謝紊亂,胰島素抵抗,誘發實驗性糖尿病。

【造模方法】

購入健康雄性大鼠(150 20g),普通維持料適應飼養3-5天,禁食3-4小時,取尾血,測定給葡萄糖前(即0小時)血糖值,給2.5g/kgBW葡萄糖后0.5、2小時血糖值,作為該批次動物基礎值。以0、0.5小時血糖水平分5個組,即1個空白對照組、1個模型對照組和3個劑量組,每組15只。空白對照組不做處理,3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予同體積溶劑,連續33天。各組給予維持料飼養,1周后模型對照組和3個劑量組更換高熱能飼料,喂飼3周后,模型對照組和3個劑量禁食24小時(不禁水),給予四氧嘧啶103-105mg/kgBW腹腔注射,注射量1ml/100g體重。注射后繼續給予高熱能飼料喂飼3-5天。試驗結束,各組動物禁食3-4小時,檢測空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。

【觀察指標】

空腹血糖、糖耐量

各組動物禁食3-4小時,測定空腹血糖即給葡萄糖前(0小時)血糖值,劑量組給予不同濃度受試樣品,模型對照組給予同體積溶劑,空白對照組不做處理,15-20分鐘后各組經口給予葡萄糖2.5g/kg BW,測定給葡萄糖后各組0.5、2小時的血糖值,若模型對照組0.5小時血糖值≥10mmol/L,或模型對照組0.5小時、2小時任一時間點血糖升高或血糖曲線下面積升高,與空白對照組比較,差異有顯著性,判定模型糖代謝紊亂成立,在此基礎上,觀察模型對照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后(0.5、2小時)血糖及0、0.5、2小時血糖曲線下面積的變化。

血糖下降率%= (實驗前血糖值-實驗后血糖值)/實驗前血糖值×100%

血糖曲線下面積=【(0小時血糖+0.5小時血糖)×0.5 +(2小時血糖+0.5小時血糖)×1.5】/2

膽固醇、甘油三脂

各組動物禁食3-4小時,檢測血清膽固醇、甘油三脂,若模型對照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高,與空白對照組比較,差異有顯著性,判定模型脂代謝紊亂成立,在此基礎上,觀察模型對照組與受試樣品組血脂變化。

胰島素

各組動物禁食3-4小時,檢測血清胰島素,模型對照組與空白對照組比較胰島素抵抗指數無明顯下降,且動物糖/脂代謝紊亂成立,判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。

胰島素抵抗指數 = 胰島素/22.5e-㏑血糖 ≈ 血糖×胰島素/22.5

【指標判定】

空腹血糖指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有統計學意義,判定該受試樣品空腹血糖指標結果陽性。

糖耐量指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,在給葡萄糖或醫用淀粉后0.5、2小時任一時間點血糖下降(或血糖下降百分率升高)有統計學意義,或0、0.5、2小時血糖曲線下面積降低有統計學意義,判定該受試樣品糖耐量指標結果陽性。

血脂指標:模型成立的前提下,受試樣品劑量組與模型對照組比較,血清膽固醇或甘油三酯下降有統計學意義,可判定該受試樣品降血脂指標陽性。

【結果判定】

空腹血糖和糖耐量二項指標中一項指標陽性,且血脂(總膽固醇、甘油三酯)無明顯升高,對正常動物空腹血糖無影響,即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動物實驗結果陽性。

六、注意事項


為了使實驗動物糖代謝功能狀態盡量保持一致,也為了準確地按體重計算受試樣品的用量,實驗前動物應嚴格禁食(不禁水),實驗前后禁食條件應一致,鼠類在禁食的同時應更換襯墊物。

如用血清樣品進行測定,應于取血后30分鐘內分離血清,分離后血清的含糖量在6小時內不變。用血清制備的無蛋白血濾液可保存48小時以上。

高濃度的還原性物質如Vit C亦能與色素原競爭游離氧,干擾反應,使結果偏低。血紅蛋白能使過氧化氫過早分解,亦干擾反應,致使測得血糖值偏低。故對已溶血的全血或血清必須制備無蛋白濾液后,再進行測定。

血糖測定方法:用試紙或試劑盒,按說明書操作;若自行配制試劑,按下列方法操作:略。



有困惑?那就商量唄!

說     明


輔助降血糖功能評價方法中使用的模型飼料是專門為鑒定或評估輔助降血糖功能食品的專用飼料,具有強制性要求或規定,既要保障質量,又要符合規定的要求。

小幫手
關閉
收藏本網站
丝瓜苹果下载ios二维码_丝瓜app官网版ios下载_丝瓜app向日葵app幸福宝