返回
專題      專題
返回

目錄

動脈粥樣硬化模型(AS)

兔動脈粥樣硬化模型飼料和模型建立方法

兔動脈粥樣硬化模型
復制和造模飼料


兔動脈粥樣硬化模型飼料和模型建立方法
Atherosclerosis model in Rabbit

用兔復制動脈粥樣硬化模型兔吸收膽固醇能力強,清除血漿膽固醇的能力差,因此,血漿膽固醇可以維持在高水平。兔對脂肪代謝能力差,容易形成高血脂,引起脂質代謝紊亂,從而繼發膽固醇升高。

關于動脈粥樣硬化模型的動物品種選擇,在前面介紹了,其中談到了兔是最早(Ignatowski, 1908)和當前仍最多使用的動脈粥樣硬化模型動物,如果你還沒有閱讀,可點擊《動脈粥樣硬化模型飼料與模型方法》。

在介紹兔動脈粥樣硬化模型的復制方法之前,先介紹至關重要的注意事項,請認真閱讀。至于不同模型方法的注意事項,在下面結合模型方法加以說明。

(1)兔的高膽固醇飼料。所謂兔的高膽固醇飼料,其中的膽固醇含量相對于大鼠小鼠等動物來說實際上并不高,例如,0.2%的膽固醇對于兔來說已經是高膽固醇飼料了,原因是兔日常飼料中幾乎不含膽固醇,而且兔對膽固醇非常敏感。

(2)切勿為了追求成模速度而追求飼料中更高含量(2%以上)的膽固醇。

(3)“動脈粥樣斑塊”:人類的動脈粥樣硬化分為三期,年輕的兔單純模型喂飼料并不形成類似人類動脈粥樣硬化第三期的典型表現,而是彌散性的“動脈粥樣斑塊”(脂質堆積或沉積)。這種損傷呈多發性,主要涉及主動脈弓、胸主動脈、肋間動脈起始段。雖然腹主動脈、內臟動脈(如腎動脈)和小動脈也可能發生,同一批兔在喂養后不同兔之間在發生的部位方面可以有差別(有的在這些部位,有的在那些部位)。從文獻中的研究結果來看,較早發生或主要發生的部位是心臟的小動脈(冠狀動脈)。而人的動脈粥樣硬化發生部位在主要在腹主動脈發生在冠狀動脈的大分支。需要較長時間,一般喂模型飼料不少于90天,必要時需要更長的喂養時間。

(4)“纖維化斑塊”:如果希望發展到纖維化斑塊,不應當選擇年輕兔,而應當使用3~4.5歲的老兔。

(5)“纖維帽”:如果要想建立這樣的斑塊,需要采取特殊措施(動脈損傷)配合模型飼料(見下面介紹的模型方法五).

(6)模型復制期間兔的低抗力差,容易繼發感染而死亡,壽命短。

(7)血液生化指標:應當觀察血漿或血清的HDL, LDL, 總膽固醇,甘油三酯,等相關指標。

(8)形態指標:血管取材后應當包括縱切血管的大體形態(拍照)、染色觀察橫切血管的斑紋或斑塊、組織切片染色觀察動脈粥樣硬化的組織學狀況。這些都是AHA對動脈粥樣硬化評分標準中所必須的指標。

二、在兔動脈粥樣硬化模型的缺點

不同含量膽固醇飼料喂養后不同喂養時間血清中總膽固醇的變化規律不同含量膽固醇飼料喂養后不同喂養時間血清中總膽固醇的變化規律。

(1)兔的動脈粥樣硬化條紋或斑塊,是在血清膽固醇和甘油三酯很高的基礎上形成的,在長期喂養過程中伴有多器官的脂肪沉積或代謝紊亂,尤其是對肝臟的較強毒性。

(2)兔的膽固醇主要在HDL中(占50%),這與人類不同(主要是LDL中,超過50%)。

(3)兔缺乏肝臟酯酶(hepatic lipase deficient),因此,血清膽固醇濃度不但與飼料膽固醇含量正相關,而且隨喂養時間呈累積性增加(而不是維持在某個水平),見右圖。

三、兔動脈粥樣硬化模型飼料的種類

有多種模型飼料,總結如下。關于這些模型飼料的使用方法和模型情況,在下面將接著介紹。

日常喂養的普通飼料中添加蛋黃粉。

日常喂養的普通飼料中添加膽固醇。

純化性兔飼料中添加膽固醇。

純化型飼料中含高脂肪高膽固醇。

純化型飼料中含高脂肪但不含膽固醇。

四、動脈粥樣硬化早期病變的兔模型方法

要復制動脈粥樣硬化的早期模型,只需要模型飼料喂養即可。所謂早期,就是動脈內皮損傷和血管中層平滑肌細胞病理改變,這些改變都非常類似于人類的動脈粥樣硬化病變。這時的斑塊沒有出血、潰瘍、血栓、纖維化。

模型方法一:日常喂養的普通飼料中添加蛋黃粉

優點:飼料成本低。

效果:能夠形成廣泛性動脈粥樣硬化模型。

缺點:模型不穩定,實驗結果不容易被自己和他人重復。

由于使用的是日常喂養的飼料基礎上添加蛋黃粉,兩個方面的因素使得模型不穩定。首先,因為主體是日糧喂養的飼料,這種類型的飼料中各種成分有不確定性,不同廠家的飼料或者同一廠家的不同批次的飼料之間都可能存在較大的差別,甚至有的廠家飼料存在多方面的問題,這些都可能影響模型效果。例如,研究已經發現,飼料中高鈣、高鎂、脂肪的類型等等很多因素都對模型效果有很大影響。另外一個方面是蛋黃粉,不同廠家生產的蛋黃粉有很大差別,膽固醇的含量也不同,純度也不同。

喂養時間:一般需要90天左右。

模型方法二:日常喂養的普通飼料中添加膽固醇

優點:飼料中膽固醇含量可以有效控制

效果:能夠形成廣泛性的動脈粥樣硬化。

缺點:模型不穩定。

原因與模型方法一相似。要注意的是,膽固醇原料不同廠家的質量相差很大,同一廠家也有不同質量和不同膽固醇純度的產品,因此,膽固醇原料也是影響模型效果的關鍵。例如,購買的膽固醇原料中含膽固醇50%,請問,其余50%是什么?所以,購買膽固醇,必需選擇符合實驗要求并且成分明確的產品。

喂養時間:取決于實驗者希望成模的速度,膽固醇越高,時間越短。一般喂養90天~120天左右。

有些研究人員片面追求成模速度,使用很高含量的膽固醇,這是不科學的。因為(1)飼料膽固醇過高,使得血清膽固醇過高,引起的動脈粥樣硬化斑塊更像黃脂增生病。(2)死亡率增大。

模型方法三:高脂肪含高膽固醇的純化型模型飼料

優點:模型相對穩定,重復性好。

效果:比較理想。

缺點:成本相對較高。

喂養時間:一般是在90天左右。

模型方法四:無膽固醇高脂肪飼料(純化型)

優點:特別適用于模擬高脂肪代謝紊亂引起的繼發性高膽固醇血癥和動脈粥樣硬化。

關鍵:飼料中脂肪的類型。

方法:喂飼高脂肪飼料,一般需要喂養半年左右。

五、動脈粥樣硬化中期、后期的兔模型方法

要在兔中復制動脈粥樣硬化的中、后期的模型,可以采用3-4.5歲的老兔,這樣的兔往往不容易。為了能夠出血斑塊的血栓和纖維化,往往采取動脈損傷配合模型飼料。

模型方法五:動脈定點損傷,喂動脈粥樣硬化模型飼料

優點:在喂飼模型飼料后不久,采取外科方法定點造成動脈損傷(內皮和平滑肌),從而誘導動脈粥樣硬化斑塊形成和動脈炎癥反應。

方法:(1)模型飼料喂養一周或兩周(此時血清膽固醇已經升高)

(2)動脈內皮損傷

【靶點動脈選擇】取決于研究者的興趣確定動脈損傷和斑塊形成的部位,比如,頸總動脈,腹主動脈,主動脈弓,等。

【導管準備】導管末端有氣囊,可以使用3F或4F Fogarty導管。3F或者4F取決于動物大小以及所插入部位的動脈大小,例如,從股動脈插入采用4F,從髂動脈插入用3F。

Fogarty導管及其連接裝置(三通管)圖中可見,一個三通管(大學的生理、藥理或病理生理學實驗室有)連接Fogarty導管,這個管的頂端有一個膨大的球(圖中是充氣狀態)。

【插管】在麻醉下插管,例如,從股動脈或左髂動脈插入導管到達靶點動脈。

【充氣損傷】通過導管向導管末端的氣囊充氣,然后輕輕稍后退,再如此重復3次,目的是造成靶點的動脈膨大引起內皮和平滑肌損傷(balloon injury)。

(3)模型飼料喂養

繼續喂養6周后改為對照飼料喂養4周。或者,改為膽固醇含量低的模型飼料喂養,或者用原先的模型飼料繼續喂養90-120天。

注意事項:預實驗非常關鍵。

曾經有一個課題組在沒有足夠預實驗的情況下,對30只兔進行外科操作,用模型飼料喂養,結果是沒有任何動物形成動脈粥樣硬化。這種盲目行為要不得!足夠的預實驗包括檢查:(1)動脈損傷操作是否有效損傷,(2)外科操作和動脈損傷是否熟練。

南通特洛菲飼料科技有限公司產品介紹
兔動脈粥樣硬化模型飼料


飼料類型:日糧型模型飼料

添加蛋黃粉的模型飼料:在日常喂養飼料基礎上添加蛋黃粉。

高膽固醇模型飼料:在日常喂養飼料基礎上添加膽固醇0.2~2%,取決于實驗需要動脈粥樣硬化模型形成的速度。

高脂高膽固醇模型飼料:在日常喂養飼料基礎上添加脂肪和膽固醇。

對照飼料:日常喂養飼料。

飼料外形:顆粒型,也可以提供粉狀或者液體狀。


注1:以上模型飼料價格較低,但沒有純化型飼料理想。

注2:不得使用其他單位生產的普通飼料替代以上的對照飼料,因為需要與模型飼料相匹配。



南通特洛菲飼料科技有限公司產品介紹
兔動脈粥樣硬化模型飼料


飼料類型:純化型模型飼料

含高膽固醇的純化型模型飼料:膽固醇含量0.2~2%,取決于實驗需要動脈粥樣硬化模型形成的速度。

含高脂肪高膽固醇的模型飼料:選用特殊的脂肪,膽固醇含量0.2~2%。

含高脂肪的模型飼料:高脂肪含量但不含膽固醇,其中,脂肪類型特殊。

對照飼料:純化型。


注1:本產品應當保存在0-4度環境,如果長期不用,應當保存在0度以下,但建議“使用前購買”,一次定購量不要過大。

注2:不得使用其他單位生產的普通飼料替代以上的對照飼料,因為需要與模型飼料相匹配。




有困惑?那就商量唄!




小幫手
關閉
收藏本網站
丝瓜苹果下载ios二维码_丝瓜app官网版ios下载_丝瓜app向日葵app幸福宝